【材料與試劑】

（1）         轉(zhuǎn)印緩沖液

    Tris堿        48mmol/L             5.8g

    甘氨酸        39mmol/L             2.9g

    SDS           0.037% (w/v)          0.37g

    甲醇           20%                  200ml

    蒸餾水                         加**1000ml

（2）甲醇

（3）6張吸水紙（Whtaman 3 MM或類似物）和1張PVDF膜

（4）電轉(zhuǎn)移裝置

【操作步驟】

（1）用蒸餾水淋洗裝置的平板電極；

（2）將凝膠切成適當(dāng)大小用于轉(zhuǎn)印。除去無關(guān)的凝膠和未使用的泳道。作好凝膠標(biāo)記以確定**條泳道的方向。在準(zhǔn)備濾紙時，將凝膠放入轉(zhuǎn)印緩沖液中；

（3）剪取6張吸水紙（Whtaman 3 MM或替代物）和1張PVDF膜，使其稍大于凝膠，將PVDF膜浸泡在甲醇溶液中5分鐘，操作時要戴手套。油污或其它蛋白質(zhì)可阻礙蛋白質(zhì)與PVDF膜結(jié)合。濾紙剪成適當(dāng)大小。如果濾紙與凝膠的邊緣重疊，電流將短路而繞過凝膠，使轉(zhuǎn)印不能有效進(jìn)行。一個可行的辦法是以封口膜作為墊子繞在凝膠的周圍將其與濾紙分開或膜的面積稍大于凝膠，使凝膠通過膜與濾紙分開；

（4）將吸水紙放入轉(zhuǎn)印緩沖液中浸濕；

（5）將凝膠、PVDF膜和濾紙放在平板裝置的底部，放置順序如下：

-底部平板陽極

a.三層轉(zhuǎn)印緩沖液浸濕的吸水紙

b.一張轉(zhuǎn)印緩沖液浸濕的PVDF膜

c.用轉(zhuǎn)印緩沖液稍微濕潤的聚丙烯酰胺凝膠

d.三層轉(zhuǎn)印緩沖液浸濕的吸水紙

-陰極

（6）仔細(xì)檢查有無氣泡，并用戴有手套的手或玻棒驅(qū)趕氣泡，吸干凝膠-濾紙夾層組合旁邊的緩沖液。許多裝置在凝膠-濾紙夾層組合旁邊有一個墊圈以防轉(zhuǎn)印時發(fā)生短路；

（7）小心將電極插入裝置頂部。接通電極（正極或紅色表示陽極）并進(jìn)行轉(zhuǎn)印。以0.8mA/cm2 凝膠，轉(zhuǎn)印45min**1.5h。轉(zhuǎn)印時間不宜太長，否則易引起干膠；

（8）轉(zhuǎn)印結(jié)束后立即斷開電源，小心拆開裝置，將膜做上標(biāo)記。電極用后要用蒸餾水清洗。