WB 實(shí)驗(yàn)在提取完蛋白質(zhì)后，就要對(duì)蛋白含量進(jìn)行測(cè)定

測(cè)定方法如下：

一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線

1、從-20℃ 取出 1 mg/ml BSA，室溫融化后，備用。

2、取 18 個(gè) 1.5 ml 離心管，3 個(gè)一組，分別標(biāo)記為 0 μg，2.5 μg，5.0 μg ，10.0 μg ，20.0 μg ，40.0 μg。

3、按下表在各管中加入各種試劑。

4、混勻后，室溫放置 2 min。在生物分光光度計(jì)上比色分析。

二、 檢測(cè)樣品蛋白含量

1、取足量的 1.5 ml 離心管，每管加入 4℃ 儲(chǔ)存的考馬斯亮藍(lán)溶液 1 ml。室溫放置 30 min 后即可用于測(cè)蛋白。

2、取一管考馬斯亮藍(lán)加 0.15mol/L NaCl 溶液 100 μl，混勻放置 2 分鐘可做為空白樣品，將空白倒入比色杯中在做好標(biāo)準(zhǔn)曲線的程序下按 blank 測(cè)空白樣品。

3、棄空白樣品，用無水乙醇清洗比色杯 2 次（每次 0.5 ml），再用無菌水洗一次。

4、取一管考馬斯亮藍(lán)加 95 μl 0.15mol/L NaCl NaCl 溶液和 5μ 待測(cè)蛋白樣品，混勻后靜置 2 min，倒入扣干的比色杯中按 sample 鍵測(cè)樣品。

注意：每測(cè)一個(gè)樣品都要將比色杯用無水乙醇洗 2 次，無菌水洗一次。可同時(shí)混合好多個(gè)樣品再一起測(cè)，這樣對(duì)測(cè)定大量的蛋白樣品可節(jié)省很多時(shí)間。測(cè)得的結(jié)果是 5 μl 樣品含的蛋白量。

（上述方法只是一家之言，可以自我變通）