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瓊脂糖凝膠電泳涉及的步驟
為了制備凝膠,將瓊脂糖粉與電泳緩沖液混合至所需濃度,并在微波爐中加熱使其熔化。
瓊脂糖凝膠濃度
所用瓊脂糖的百分比取決于要分離的片段的大小。
瓊脂糖的濃度是指瓊脂糖相對(duì)于緩沖液體積的百分比(w / v),瓊脂糖凝膠通常在0.2%至3%的范圍內(nèi)。
瓊脂糖濃度越低,DNA片段遷移越快。
通常,如果目的是分離大的DNA片段,則應(yīng)使用低濃度的瓊脂糖,如果目的是分離小的DNA片段,則建議使用高濃度的瓊脂糖。
將溴化乙錠添加到凝膠中(最終濃度為0.5 ug / ml),以促進(jìn)電泳后DNA的可視化。
將溶液冷卻至約60°C后,將其倒入裝有樣品梳子的澆鑄盤中,使其在室溫下固化。
凝膠固化后,將梳子移開,注意不要撕裂孔的底部。
仍在塑料托盤中的凝膠水平插入
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并用緩沖液覆蓋。
然后將含有DNA與上樣緩沖液混合的樣品吸移到樣品孔中,將蓋子和電源線放在設(shè)備上,并施加電流。
可以通過觀察電極上的氣泡確認(rèn)電流。
鑒于其負(fù)電荷,DNA將遷移至通常為紅色的正電極。
DNA遷移到凝膠中的距離可以通過肉眼監(jiān)測(cè)跟蹤染料(如溴酚藍(lán)和二甲苯氰染料)的遷移來判斷。
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瓊脂糖凝膠電泳的要求/儀器
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