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凝膠電泳誤差源

凝膠電泳是分子生物學(xué)中用于DNA分析的主要方法之一。此方法涉及DNA片段通過凝膠的遷移,在凝膠中它們根據(jù)大小或形狀分開。但是,即使是科學(xué)上合理的方法,例如凝膠電泳,也無法避免錯誤。

電泳如何工作

DNA可以使用凝膠電泳進行分析。
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凝膠電泳涉及使用通常由聚合物如瓊脂糖制成的凝膠。將凝膠浸入傳導(dǎo)電場的緩沖溶液中。首先使用限制酶將目標DNA樣品片段化,然后注入凝膠中。打開電場后,凝膠中的DNA片段會向正極遷移。如果DNA片段大小不同,則每個大小片段的遷移時間都會不同。然后使用染料或放射自顯影將片段可視化,并在凝膠中顯示為條帶。

樣品污染

微量移液器通常用于將樣品注入凝膠。
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電泳法的主要應(yīng)用是在分子生物學(xué)中分析DNA的工具,但在法醫(yī)學(xué)中也用作鑒定犯罪現(xiàn)場樣本的手段。為了獲得準確的結(jié)果,最小化此技術(shù)中的錯誤來源很重要。錯誤的來源之一是DNA樣品的污染。如果樣品中有外源DNA,則凝膠中的條帶比僅包含純化樣品的凝膠中的帶多。

凝膠,電流和緩沖液問題

電源穩(wěn)壓器用于保持凝膠電泳中的電壓穩(wěn)定。
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凝膠的濃度也必須正確以避免錯誤。如果濃度太高或太低,碎片將遷移得太慢或太快。這將導(dǎo)致解析不同頻段時出現(xiàn)錯誤。在電泳過程中,必須注意確保電壓穩(wěn)定。電壓的任何波動都將導(dǎo)致DNA片段不穩(wěn)定遷移,從而導(dǎo)致條帶讀取錯誤。緩沖溶液還必須具有正確的組成,因為具有錯誤pH或離子濃度的緩沖液會改變DNA片段的形狀,并改變其遷移時間。

正確的可視化

可視化凝膠中的每個條帶代表一組大小相同的DNA片段。
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最重要的是,凝膠必須正確可視化。如果用于可視化樣品的染料或放射性探針的濃度太高,則生成的圖像將非?;靵y,因為殘留碎片也將可視化。如果凝膠濃度太低,將無法可視化。在所有階段都遵循正確的過程后,凝膠電泳儀將得出準確且可以放心使用的結(jié)果。與所有科學(xué)程序一樣,凝膠電泳容易出錯,但可以通過適當?shù)臏蕚浜筒僮鲗⑵渥钚』?/p>