凝膠電泳法
當(dāng)將含有細(xì)菌內(nèi)毒素的溶液與裂解物混合后進(jìn)行孵育時(shí)，方法A和B取決于牢固凝膠的形成。方法A作為極限測(cè)試進(jìn)行，其中受檢制劑的兩種重復(fù)溶液中所含的內(nèi)毒素的濃度均應(yīng)低于各論中規(guī)定的內(nèi)毒素極限濃度。方法B半定量測(cè)定所檢查制劑中的內(nèi)毒素濃度。
裂解液的敏感性
在測(cè)試中使用每批裂解物至少一個(gè)小瓶之前，請(qǐng)確認(rèn)每批新裂解物的標(biāo)記靈敏度。準(zhǔn)備一系列的CSE稀釋液，使?jié)舛确謩e為2λ，λ，0.5λ和0.25λ，其中λ是裂解液在EU中每毫升的標(biāo)記靈敏度。對(duì)這四個(gè)標(biāo)準(zhǔn)濃度一式兩份，按照方法給出的方法進(jìn)行測(cè)試，并包括由水BET組成的陰性對(duì)照。至少每個(gè)系列中的最終稀釋液必須給出陰性結(jié)果。
計(jì)算在發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果的每個(gè)稀釋系列中最低內(nèi)毒素濃度的對(duì)數(shù)平均值。幾何平均終點(diǎn)濃度是裂解液的測(cè)量靈敏度，以ED / ml為單位，可使用以下表達(dá)式計(jì)算：
幾何平均終點(diǎn)濃度=反對(duì)數(shù)（∑e / f）
其中，∑e =對(duì)數(shù)之和使用的一系列稀釋液的終點(diǎn)濃度
f =復(fù)制試管的數(shù)量。
該平均值給出了估計(jì)的裂解物敏感性，必須在0.5λ和2λ之間。
測(cè)試干擾因素
應(yīng)牢記某些因素干擾細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)試的可能性。為了驗(yàn)證測(cè)試結(jié)果，必須證明測(cè)試制劑不會(huì)抑制或增強(qiáng)反應(yīng)或以其他方式干擾測(cè)試。的驗(yàn)證如果裂解物的供應(yīng)商或制造或樣品的制劑的方法改變必須被重復(fù)。
用水BET稀釋測(cè)試制劑是克服抑制作用的最簡(jiǎn)單方法。
允許的稀釋水平或最大有效稀釋度（MVD）取決于產(chǎn)品的濃度，產(chǎn)品的內(nèi)毒素極限和裂解物的敏感性。它由以下表達(dá)式計(jì)算：
MVD =內(nèi)毒素極限x測(cè)試溶液的濃度
λ
準(zhǔn)備測(cè)試溶液。如表中所示準(zhǔn)備溶液A到D的重復(fù)樣品。
溶液A =稀釋度等于或低于MVD的產(chǎn)品溶液（測(cè)試溶液）。
溶液B =加標(biāo)有指定CSE濃度的測(cè)試溶液（正產(chǎn)品控制； PPC）。
溶液C =在水BET中具有指示的CSE濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
溶液D =水BET（陰性對(duì)照； NC）。
方法
在試管，小瓶或微量滴定板孔等容器中執(zhí)行以下步驟。在每個(gè)選定的容器中，添加適量的陰性對(duì)照（NC），水BET中的標(biāo)準(zhǔn)CSE溶液，測(cè)試溶液和陽(yáng)性產(chǎn)品對(duì)照（PPC）。除非使用單個(gè)測(cè)試瓶，否則應(yīng)間隔一定時(shí)間以允許讀取每個(gè)結(jié)果，向每個(gè)容器中添加等體積的適當(dāng)構(gòu)成的裂解液。輕輕地混合樣品裂解物混合物，然后放置在諸如水浴或加熱塊的培養(yǎng)裝置中，準(zhǔn)確記錄放置容器的時(shí)間。將每個(gè)容器在不受干擾的37°±10孵育60±2分鐘。取下容器并仔細(xì)檢查內(nèi)容物。
將此結(jié)果記錄為正（+）。陰性結(jié)果的特征是不存在這種凝膠或形成不保持其完整性的粘性凝膠。將這樣的結(jié)果記錄為負(fù)（-）。小心處理容器，避免使它們?cè)馐懿槐匾恼駝?dòng)，因?yàn)榭赡軐?dǎo)致錯(cuò)誤的負(fù)面觀察。
通過(guò)使用在裂解物敏感性下描述的公式，計(jì)算C帶系列溶液的幾何平均終點(diǎn)濃度。
計(jì)算和結(jié)果解釋
如果
（a）系列A和D的解決方案給出否定的結(jié)果，則干擾因素的檢驗(yàn)是有效的；
（b）用C系列溶液獲得的結(jié)果證實(shí)了裂解物的標(biāo)記靈敏度；
（c）B系列溶液終點(diǎn)濃度的幾何平均值不大于21或不小于0.51。
如果獲得的結(jié)果超出規(guī)定的范圍，則所檢測(cè)的測(cè)試制劑將充當(dāng)抑制劑或活化劑?？梢酝ㄟ^(guò)進(jìn)一步稀釋（不超過(guò)MVD），過(guò)濾，中和，滅活或通過(guò)去除干擾物質(zhì)來(lái)消除干擾因素。使用更敏感的裂解液可以對(duì)所檢查的制劑進(jìn)行更大的稀釋。如果干擾因素通過(guò)標(biāo)稱分離極限的分子量對(duì)應(yīng)于10,000到20,000的過(guò)濾器，例如三乙酸纖維素的不對(duì)稱膜過(guò)濾器，則可以使用超濾。
應(yīng)該檢查這種過(guò)濾器是否存在任何導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果的因素。用水BET或pH 7.4 BET的三氯化物緩沖液沖洗保留在過(guò)濾器上的含有內(nèi)毒素的物質(zhì)。內(nèi)毒素在水BET或緩沖液中回收。確定每種待測(cè)制劑的測(cè)試體積和最終體積中的內(nèi)毒素濃度。
通過(guò)使用添加了CSE并已提交給所選治療方法的待測(cè)制劑，通過(guò)重復(fù)進(jìn)行干擾因子測(cè)試，確定所選治療方法可有效消除干擾，而不會(huì)去除內(nèi)毒素。
